融合蛋白（重组结核杆菌融合蛋白）

彩虹养生网精选：

• 1、外源基因在原核细胞中表达时蛋白质的存在形式有哪些?
• 2 、融合蛋白表达载体如何构建
• 3
  、白细胞介素融合蛋白
• 4、融合蛋白linker仅用一个丝氨酸就行么

外源基因在原核细胞中表达时蛋白质的存在形式有哪些?

1 、游离蛋白质（Free proteins）：外源基因被转录和翻译后
，产生的蛋白质可以以游离的形式存在于细胞质中。这些蛋白质可以执行其特定的功能，例如催化化学反应
、结合DNA或其他分子等 。

2、包涵体是外源基因在原核细胞中表达时 ，尤其在大肠杆菌中高效表达时
，形成的由膜包裹的高密度 、不溶性蛋白质颗粒，在显微镜下观察时为高折射区 ，与胞质中其他成分有明显区别
。包涵体的形成比较复杂
，与细胞质中蛋白质的形成速率有关。

3
、在表达外源蛋白质时，真核细胞如哺乳动物细胞存在一些局限性 。首先 ，它们的天然蛋白质表达量低
，且外源蛋白可能存在无活性或聚集体的问题
。其次，真核细胞基因研究相对不成熟 ，而大肠杆菌基因则被广泛理解和利用于基因重组。大肠杆菌生长速度快
，且培养成本较低，适宜大规模生产 。

4、包涵体是外源基因在原核细胞中表达时 ，尤其在大肠杆菌中高效表达时，形成的由膜包裹的高密度 、不溶性蛋白质颗粒
，在显微镜下观察时为高折射区，与胞质中其他成分有明显区别
。

融合蛋白表达载体如何构建

1
、在生物技术的日益发展中 ，标签融合蛋白纯化技术因其高效性和便捷性得到了广泛应用。要实现这一目标
，关键在于构建合适的原核表达载体 。首先，我们需要理解蛋白表达系统的基本构成 ，包括启动子、调控序列和载体等元素
。商业载体针对不同宿主如大肠杆菌或哺乳动物细胞进行了优化
，通常配备有便于筛选的抗性标记。

2 、载体构▁▂▃▄▅▆▇█▉▊▋▌▍建是分子生物学研究常用的手段之一 。主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子
、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证
。

3、要成功构建AAV载体，首先要理解其基因组结构：一个7kb的单链DNA ，由复制和转录元件（ITR） 、Rep和Cap基因组成
，其中Cap基因编码衣壳蛋白，是构建的关键组件。在构建过程中 ，可以灵活地替换Rep和Cap基因
，利用包装质粒和辅助质粒来实现高效表达的定制化 。

4
、构建表达载体：将目标蛋白质的编码序列克隆到GST表达载体中，使用限制性内切酶将克隆的DNA片段插入到GST表达载体中 ，使其与GST基因相连
。转染表达：将构建好的表达载体转化到大肠杆菌中，并在含有诱导剂（如IPTG）的培养基中诱导表达
，使其产生靶蛋白-GST融合蛋白。

5、构建融合蛋白的基本原则是， 将第一个蛋白的终止密码子删除 ，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因
，以实现两个基因的共同表达 。具体步骤有：进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则 ，设计合适的引物序列 ，以cDNA为模板
，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段
。

白细胞介素融合蛋白

1 、是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名 ，现仍一直沿用 。白细胞介素interleukin 缩写为IL
。关于免疫反应的表达和调节
，有来源于淋巴细胞或巨噬细胞等许多因子参与。

2
、该研究试验验证了Lowry法测定重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的方法，为后续试验提供重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的检测方法 。发现Lowry法测定重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的方法稳定、可重现
。重组人血清白蛋白-白细胞介素2在200~10g/mL质量浓度范围内均一。

3 、此外 ，他在Protein Expression and Purification上发表了关于人C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白2融合蛋白的表达与稳定性的研究
，同样被SCI核心收录，IF为7 。他还与其他作者合作 ，研究了人白细胞介素--8的高效表达与纯化，这些论文同样被SCI收录
，IF分别为7和96。

4
、肝细胞是SAA的主要来源[38]
。SAA升高的原因是循环血清白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-）增加[39]。由内皮细胞（ECs）、淋巴细胞 、特别激活的单核细胞和巨噬细胞产生的炎症相关细胞因子刺激淀粉样蛋白A的合成[35，40] 。

5
、从1989年我国第一个生物工程药物-干扰素上市以来 ，到2003年
，我国已有重组人干扰素、促红细胞生成素 、白细胞介素-人生长素、葡激酶
、重组改构人肿瘤坏死因子、神经生长因子 、人胰岛素等21种基因工程药品投入市场，其中近1/3为国家创新药物 ，另有10多个品种在临床研究之中
。

融合蛋白linker仅用一个丝氨▁▂▃▄▅▆▇█▉▊▋▌▍酸就行么

1
、一个丝氨酸通常是不行的
，因为一个氨基酸太小，被融合的两个蛋白之间空间太小 ，不利于蛋白表达并正确折叠。最少也要两个氨基酸
，通常是5个（甘氨酸和丝氨酸搭配使用，如GGGGS） 。

2、构建融合蛋白时 ，Linker的选择至关重要
，长度 、结构
、氨基酸组成和核苷酸序列都要细致考虑
。正确的Linker设计对蛋白功能和产量的优化至关重要。

3、虽然有上述局限性，但该方法仍很重要 ，尤其对于片段缩合而言，因为该方法具有较低的异构化倾向
，适用于羟基未保护丝氨酸或苏氨酸组分时，N保护的本行酰肼还具有多种用途 。酸酐法 在多肽合成中 ，最初考虑应用酸酐要追溯到1881年Theodor Curtius对苯甲酰基氨基乙酸合成的早期研究
。